Оценка т- и в- систем иммунитета при псороптозе овец и совершенствование мер борьбы с ним. Оценка машин, оборудования и транспортных средств Относительная длина отделений, %

С помощью метода «спонтанных» розеток (розеткообразование с эритроцитами барана) определяют количество Т-лимфоцитов в крови. Обязательным является расчет абсолютного количества розеткообразующих лимфоцитов в 1 мкл крови. Вычисление только их процента среди всех лим-фоцитов может привести к ошибке. Например, в норме среди лимфоцитов крови содержится 60% Т-клеток, а при В-лейкозах Т-лимфоцитов в крови

может быть около 1%, но это не значит, что имеется 60-кратное угнетение Т-системы иммунитета. Если общее количество лимфоцитов у данного больного в 60 раз больше, чем у здорового человека, то абсолютное число Т-лимфоцитов в его крови нормально.

Реакция бласттрансформации лимфоцитов под влиянием ФГА или в микст-культуре. Эту и предыдущую пробу необходимо проводить параллельно, поскольку при некоторых иммунодефицитах угнетение реакции бласттрансформации свидетельствует не о снижении уровня Т-лимфоцитов в крови, а об угнетении их функциональной активности. Например, при иммунодефиците с атаксией - телеангиэктазией регистрируется почти полное угнетение бласттрансформации при нормальном количестве Т-розеток среди лимфоцитов. До разработки метода «спонтанных» розеток угнетение бласттрансформации расценивали как показатель снижения
количества Т-лимфоцитов в крови.

Определение динамики бласттрансформации. Эту реакцию необходимо учитывать не в один какой-либо срок культивирования лимфоцитов, а в динамике с использованием разных доз митогена. Кривые зависимости время - эффект и доза - эффект лучше всего отражают данный вид функции-ональной активности лимфоцитов. Наиболее объективный учет бласттранс-формации во всех случаях требует применения радиоизотопной методики с определением включения меченых нуклеотидов в клетки. Оценка продукции лимфоцитами периферической крови гуморальных медиаторов клеточного иммунитета. Наиболее распространен тест подавления миграции макрофагов фактором, угнетающим их миграцию, выделяемым сенсибилизированными лимфоцитами под влиянием соответствующего антигена. С помощью этого метода можно установить сенсибилизацию организма к тому или иному антигену.

Постановка кожных реакций гиперчувствительности замедленного типа на широко распространенные антигены (туберкулин, трихофитии и др.). Конечно, негативные реакции не могут служить доказательством неполно­ценности Т-системы иммунитета, так как организм может быть не сенсиби-лизирован к используемым препаратам. Контактная аллергия к динитро-хлорбензолу (ДНХБ). Этот гаптен при накожной аппликации вызывает развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа. Повторное нанесение препарата дает типичную кожную реакцию. Поскольку вероят-ность контакта индивидуума с данным редким химическим соединением ничтожна, проба с ДНХБ служит весьма распространенным методом оценки способности организма развивать гиперчувствительность замедленного типа, т. е. функциональной активности Т- системы иммунитета.

Отторжение аллогенного кожного лоскута. Эта реакция также относится к гиперчувствительности замедленного типа и осуществляется в основном Т-лимфоцитами. Однако трансплантация чужеродной ткани приводит к сенсибилизированности организма по отношению к трансплантационным анти-генам, что может оказаться нежела­тельным при последующем лечении больного такими методами, как пересадка костного мозга, вилочковой железы и др.

Биопсия лимфатических узлов и гистологическая оценка тимусзависимых областей и вилочковой железы. Эти тесты ставятся в сложных для диагностики случаях при подозрениях на комбинированные иммунодефициты и злокачественные новообразования.

В 1981 г. Всемирная организация здравоохранения опубликовала Меморан-дум по правильному и неправильному применению широко используемых методов клинической иммунологии. Этот документ, составленный группой авторитетных клинических иммунологов, характеризует особенности показаний к применению наиболее часто используемых тестов. В документе выделяется два уровня значимости исследования - абсолютная необхо-димость и полезность. Анализируется 8 иммунологических тестов.

1. Количественная оценка иммуноглобулинов в сыворотке крови абсолютно необходима при подозрении на наличие первичного или вторичного иммуно-дефицита, а также для слежения за течением заболеваний при гамма-глобу-линотерапии. Количественная оценка сывороточных иммуноглобулинов полезна для отличия «доброкачественных» идиопатических моноклональных гаммапатий от миеломы. Определение уровня IgМ в пуповинной крови ново­рожденных полезно при подозрении на врожденную инфекцию.

2. Иммуноэлектрофоретический анализ иммуноглобулинов в биологических жидкостях абсолютно необходим при подозрении на наличие следующих болезней: миелома, макроглобулинемия Вальденстрема, болезни тяжелых цепей, амилоидоз, болезни, связанные с отложением иммуноглобулинов в тканях. Этот анализ также необходим при таких аномалиях, как наличие криоглобулинов, протеинурии типа Бенс- Джонса, повышенной вязкости сыворотки. Иммуноэлектрофорез полезен при некоторых им-мунопролиферативных заболеваниях.

3. Оценка уровня общего IgЕ абсолютно необходима только в одном редком случае (гипер-IgЕ-синдром, ассоциированный с эозинофилией и рецидиви-рующими инфекциями), но может быть полезна при дифференциации между IgЕ- и не IgЕ-опосредуемыми нарушениями, которые клинически неразличи-мы (риниты, бронхиальная астма, дерматиты и сыпи, пищевая неперено-симость). Измерение количества специфического IgЕ не является абсолютно необходимым ни при какой патологии. Этот тест не может полностью заменить аллергологический анамнез и кожные пробы. Оценка уровня специфического IgЕ полезна при тяжелых дерматитах или дермографизме, в случаях, когда терапия приводит к изменению кожных реакций, при очень сильных кожных реакциях и т. п.

4. Определение комплемента по тотальному тесту 50 % гемолитической активности является необходимым только при подозрении на генетически обусловленные дефекты в системе комплемента. Оценка по этому тесту или путем определения С3 и С4 компонентов комплемента полезна для слежения за течением болезни и эффективностью терапии при гломерулонефрите, при таких иммунокомплексных болезнях, как системная эритематозная волчанка, и некоторых формах васкулитов, а также при геморрагической лихорадке Денге.

5. Определение иммунных комплексов в биологических жидкостях не является абсолютно необходимым ни в каких клинических ситуациях. Их присутствие в сыворотке крови неспецифично для болезней иммунных комплексов. Повреждения тканей, индуцированные иммунными компексами, могут развиваться без определимых количеств циркулирующих в крови комплексов. Наоборот, присутствие комплексов в крови может не сопрово-ждаться наличием тканевых повреждений. Более ценным является прямой анализ проб тканей. Оценка иммунных комплексов может быть полезной для определения активности процесса при таких болезнях, как ревматоидный артрит и системная красная волчанка, и при контроле за эффективностью обменных переливаний плазмы и для прогноза течения таких опухолевых процессов, как острый лейкоз.

6. Определение аутоантител путем непрямой иммунофлюоресценции абсолютно необходимо как тест на наличие антиядерных антител при диагностике системной красной волчанки. Обнаружение антиядерных антител полезно для диагностики так называемых смешанных болезней соединительной ткани, хронического активного гепатита и прогрессивного системного склероза. Тест на тиреоидные аутоантитела необходим для диагностики хронического тиреоидита и микседемы взрослых. Определение других аутоантител методом непрямой иммунофлюоресценции полезно в конкретных нечастых случаях.

7. Определение количества В- и Т-клеток абсолютно необходимо для диагностики и слежения за течением первичных иммунодефицитов, а также для классификации лимфопролиферативных заболеваний. При этом желательно использовать одновременно несколько реагентов, например моноспецифические антииммуноглобулиновые антитела и моноклональные антитела против лимфоидных популяций. Изучение субпопуляций Т- и В-лимфоцитов полезно у отдельных пациентов.

8. Оценка ответа лимфоцитов на митогены как показатель клеточно - опосре-дованного иммунитета не может быть рекомендована как каждодневный (рутинный) метод. Его следует использовать только выборочно. Показатель единичного измерения, даже если он далеко выходит за пределы нормы, имеет очень малую клиническую ценность и не обязательно свидетельствует о нарушении клеточно-опосредованного иммунитета. Оценка этой формы иммунитета абсолютно необходима в случаях предполагаемого или дока-занного первичного иммунодефицита. Оценка клеточного иммунитета поле-зна для исследования вторичных иммунодефицитов, включая те, которые связаны с хроническими инфекциями, и для контроля за применением иммуностимулирующей терапии.

​ t-критерий Стьюдента – общее название для класса методов статистической проверки гипотез (статистических критериев), основанных на распределении Стьюдента. Наиболее частые случаи применения t-критерия связаны с проверкой равенства средних значений в двух выборках.

1. История разработки t-критерия

Данный критерий был разработан Уильямом Госсетом для оценки качества пива в компании Гиннесс. В связи с обязательствами перед компанией по неразглашению коммерческой тайны, статья Госсета вышла в 1908 году в журнале «Биометрика» под псевдонимом «Student» (Студент).

2. Для чего используется t-критерий Стьюдента?

t-критерий Стьюдента используется для определения статистической значимости различий средних величин. Может применяться как в случаях сравнения независимых выборок (например, группы больных сахарным диабетом и группы здоровых ), так и при сравнении связанных совокупностей (например, средняя частота пульса у одних и тех же пациентов до и после приема антиаритмического препарата ).

3. В каких случаях можно использовать t-критерий Стьюдента?

Для применения t-критерия Стьюдента необходимо, чтобы исходные данные имели нормальное распределение . В случае применения двухвыборочного критерия для независимых выборок также необходимо соблюдение условия равенства (гомоскедастичности) дисперсий .

При несоблюдении этих условий при сравнении выборочных средних должны использоваться аналогичные методы непараметрической статистики , среди которых наиболее известными являются U-критерий Манна - Уитни (в качестве двухвыборочного критерия для независимых выборок), а также критерий знаков и критерий Вилкоксона (используются в случаях зависимых выборок).

4. Как рассчитать t-критерий Стьюдента?

Для сравнения средних величин t-критерий Стьюдента рассчитывается по следующей формуле:

где М 1 - средняя арифметическая первой сравниваемой совокупности (группы), М 2 - средняя арифметическая второй сравниваемой совокупности (группы), m 1 - средняя ошибка первой средней арифметической, m 2 - средняя ошибка второй средней арифметической.

5. Как интерпретировать значение t-критерия Стьюдента?

Полученное значение t-критерия Стьюдента необходимо правильно интерпретировать. Для этого нам необходимо знать количество исследуемых в каждой группе (n 1 и n 2). Находим число степеней свободы f по следующей формуле:

После этого определяем критическое значение t-критерия Стьюдента для требуемого уровня значимости (например, p=0,05) и при данном числе степеней свободы f по таблице (см. ниже ).

Сравниваем критическое и рассчитанное значения критерия:

• Если рассчитанное значение t-критерия Стьюдента равно или больше критического, найденного по таблице, делаем вывод о статистической значимости различий между сравниваемыми величинами.
• Если значение рассчитанного t-критерия Стьюдента меньше табличного, значит различия сравниваемых величин статистически не значимы.

6. Пример расчета t-критерия Стьюдента

Для изучения эффективности нового препарата железа были выбраны две группы пациентов с анемией. В первой группе пациенты в течение двух недель получали новый препарат, а во второй группе - получали плацебо. После этого было проведено измерение уровня гемоглобина в периферической крови. В первой группе средний уровень гемоглобина составил 115,4±1,2 г/л, а во второй - 103,7±2,3 г/л (данные представлены в формате M±m ), сравниваемые совокупности имеют нормальное распределение. При этом численность первой группы составила 34, а второй - 40 пациентов. Необходимо сделать вывод о статистической значимости полученных различий и эффективности нового препарата железа.

Решение: Для оценки значимости различий используем t-критерий Стьюдента, рассчитываемый как разность средних значений, поделенная на сумму квадратов ошибок:

После выполнения расчетов, значение t-критерия оказалось равным 4,51. Находим число степеней свободы как (34 + 40) - 2 = 72. Сравниваем полученное значение t-критерия Стьюдента 4,51 с критическим при р=0,05 значением, указанным в таблице: 1,993. Так как рассчитанное значение критерия больше критического, делаем вывод о том, что наблюдаемые различия статистически значимы (уровень значимости р<0,05).

Развитие Т-лимфоцитов происходит в центральном органе иммунитета - вилочковой железе (Ф. Бернет, 1971). Среди тимоцитов выделяют три самостоятельные популяции: Т-хелперы (помощники), Т-супрессоры (подавители) и Т-эффекторы. Четвертый тип тимоцитов - киллеров (убийц) накапливается под влиянием антигенной стимуляции Т-эффекторов и завершает тем самым иммунные реакции клеточного типа. Особое значение в настоящее время придается взаимоотношению Т-хелперов и Т-супрессоров, которые обладают способностью тормозить и останавливать антителопродукцию, обеспечивая иммунологическую толерантность (Л. Н. Фонталин, Л. А. Певницкий, 1978, и др.).

Для определения функциональной активности Т-системы применяются следующие методы: подсчет циркулирующих Т-лимфоцитов, реакция бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ), реакция ингибиции миграции лимфоцитов (РИМЛ), спонтанное розеткообразование клеток (Е РОК), чувствительность лимфоцитов к кортизолу, цитотоксические тесты при использовании антисывороток к Т-лимфоцитам, определение функциональной активности Т-супрессоров и др. (А. Н. Чередеев, 1976, и др.). Наиболее информативными методами являются РБТЛ и Е-РОК.

Метод РБТЛ основан на том, что Т-лимфоциты в питательной среде под влиянием стимулятора фотогемагглютинина (ФГА) могут превращаться (трансформироваться) в недифференцированные зародышевые клетки (бласты). Допускается, что это происходит за счет освобождения лизосомальных ферментов и разрушения РНК- Чем интереснее происходит превращение лимфоцитов в бласты, тем активнее и полноценнее Т-система (О. И. Епифанова с соавт., 1977).

Существует два метода определения РБТЛ : морфологический и изотопный. Наиболее перспективным методом является изотопный, основанный на определении блаеттрансформацин по включению меченого тимидина (Из) в ДНК лимфоцитов (И. Н. Брауде, 1969; П. Г. Назаров, В. И. Пуринь, 1975, и др). Результаты выражаются в индексах стимуляции.

По данным С. К. Евтушенко (1980), у доноров норма РБТЛ с ФГА составила 61,71 ±9,72 (размах индекса стимуляции после 72 ч инкубации составил от 18,36 до 231,24), что близко к данным литературы (А И. Евсеева с соавт., 1976). Для оценки спецификой сенсибилизации противомозговыми антителами Т-лимфоцитов вместо ФГА в инкубируемую смесь мы добавляли по 1 капле водно-солевого экстракта мозгового антигена (МАГ), приготовленного из различных участков мозга, предварительно определив его митогенпую активность (то есть находили минимальное количество антигена, которое вызывало бластн>ю трансформацию лимфоцитов). Параллельно проводится контроль без ФГА, МАГ и других антигенов.

Реакция спонтанного розеткообразования Т-клеток основана на образовании розеток из Т-лимфоцитов и эритроцитов барана (Е-РОК), которые являются индикаторами (маркерами) Т-лимфоцитов (М Jondal с соавт., 1972). В ограниченном препарате среди всех типов лейкоцитов подсчитывается процент розеткообразующих лимфоцитов. Норма Е-РОК, по нашим данным, составила (51,0+9,7)%, что также близко к данным литературы (С. И. Донское с соавт., 1975, и др.).

Низкий процент розеткообразования лимфоцитов говорит о пониженной активности Т-лимфоцитов, а если он резко снижен, то это указывает на иммунодефицитное состояние (R. Hong, 1977, и др.), требующее соответствующей иммуностимулирующей коррекции.

Проводятся попытки классифицировать поражения нервной системы при аллергии (С. И. Каплаи, 1967; Я. В. Медведев, 1968; W. Wilson, 1967, и др.). В частности, F. Speer (1967) предлагает многообразие всех клинических форм этой патологии объединить в общее понятие «нейроаллергия». Ряд авторов рассматривают нарушения нервной системы при аллергии как часть общего аллергического процесса (Н. К. Боголепов, С. И. Каплан, 1971; Б. С. Агте, С. К. Евтушенко, 1974; J. Blamantier, S. Denimal, 1966, и др.).

Наши последующие исследования (Б. С. Агте, С. К. Евтушенко, 1976, 1980) также подтверждают эти выводы, в связи с чем неврологические проявления аллергии в клинической практике мы условно называем нейроаллергопатией.

Z-показатель или стандартизированный показатель - этопоказатель, определяющий количество стандартных отклонений, на которое отклоняется полученный результат от среднего результата в нормативной выборке.

Шкала Z-оценок (стандартизированныйZ-показатель)

Шкала стандартных отклонений

Шкала стандартных отклонений в самом простом варианте представляет собой шкалу из трех уровней, каждый из которых соответствует определенной степени выраженности диагностируемого свойства. Дадим характеристику этих уровней.

· Первый уровень соответствует левой части распределения до одной сигмы и отражает низкуюстепеньвыраженности свойства. Все сырые оценки, которые попадают в данный диапазон, независимо от первичного значения, будут свидетельствовать о низкой выраженности диагностируемого параметра.

· Второй уровень шкалы соответствует диапазону от 1 сигмы слева до одной сигмы справа. В центре этого диапазона находится среднее значение по выборке. Данный уровень отражает среднюю степень выраженности свойства. Согласно функции нормального распределения этот уровень имеют 68, 27% испытуемых в нормативной выборке.

· Третий уровень, отражающий значительную выраженность исследуемого свойства, занимает диапазон от первой сигмы справа до правого конца кривой нормального распределения.

В простом варианте описанная шкала состоит из трех уровней, однако возможны варианты и с большим количеством градаций. Как правило, в этих вариантах первый и третий уровни разбиваются на дополнительные уровни в соответствии с интервалами стандартных отклонений.

Недостатки данной шкалы очевидны. Во-первых, шкала имеет небольшое количество градаций, что обусловливает потери диагностической информации. Во-вторых, данная шкала представляет собой, по сути, рейтинговую нормализованную шкалу. Это ограничивает возможности статистического анализа полученных результатов.

На основе значений Z-показателя составляется шкала Z-оценок. Дадим ее характеристику.

· Математически Z-показатель рассчитывается как отношение разности данной сырой оценки и средней оценки в нормативной группе к величине стандартного отклонения.

· Шкала Z-оценок включает 7 или 9 меток. По своей структуре она эквивалентна шкале стандартных отклонений.

· Название «Z-показатель» соответствует представлению данных в форме нормального распределения (Z-распределения).

· Метка в середине шкалы соответствует сырому среднему значению в популяции и принимает значение «0».

· Слева и справа от средней метки находятся равные интервалы, которые соответствуют интервалам 1, 2, 3 и 4 сигм (средних квадратичных отклонений).

· Метки справа имеют соответственно значения «1», «2», «3» и «4 (в случае, если добавляется интервал от 3 сигмы до 4 сигмы).

· Метки справа от среднего значения имеют соответствующие отрицательные значения от «-1» до «-3» или «-4».

Таким образом, шкала Z-оценок включает отрицательные и положительные значения, а также оценку «0». Такая структура шкалы создает трудности для последующего анализа и интерпретации полученных данных. В связи с этим на основе Z-показателя предложены более приемлемые варианты нормализации сырых значений. Одним из таких вариантов является преобразованныйZt-показатель.

Zt-показательпредставляет собой преобразованную Z-оценку.Zt-оценкавычисляется по формуле Zt = A+BxZ, где

А – среднее значение распределения преобразованных оценок,

В – стандартное отклонение преобразованного распределения,

символ «х» - знак умножения.

Из приведенной формулы следует, что Zt учитывает не только среднее значение и среднее квадратичное отклонение распределения сырых оценок, но также среднее значение и среднее квадратичное отклонение распределения уже нормализованных оценок. Преимущество такого преобразования Z-показателя состоит в том, что статистические параметры нормализованного распределения могут выбираться произвольно. В психометрии по общему согласию специалистов в качестве среднего значения нормализованного распределения было выбрано значение «50», а значение стандартного отклонения - «10». В этом случае Zt-показатель стал называться как «Т-балл».

Шкала Т-баллов – это шкала стандартизированных оценок, в которой каждая оценка рассчитывается по формуле:

T = 50+10х(сырая оценка – средняя сырая оценка)/стандартное отклонение распределения сырых оценок.

Т-баллы всегда принимают положительные значения и имеют нормальное распределение со средним значением «50» и стандартным отклонением «10». «Нормальные» оценки по шкале Т-баллов, свидетельствующие о средней выраженности диагностируемого свойства, соответствуют диапазону в пределах 2 стандартных отклонений, обычно от 30 до 70 Т-баллов.

Как и в случае шкалы Z-оценок, основные метки Т-шкалы в целом соответствуют меткам шкалы стандартных отклонений. Например, интервал Т-баллов соответствует интервалу [среднее значение…. одна сигма] по шкале стандартных отклонений слева, или интервалу по шкале Z-оценок.

Шкала Т-баллов удобнее для интерпретации по сравнению с предыдущими шкалами. По своей форме она представляет собой шкалу интервалов и имеет непрерывный характер. С другой стороны, следует помнить, что шкала Т-баллов по сути подобна шкале стандартных отклонений и в строгом смысле она не является шкалой интервалов. В ее конструкции приняты определенные условные допущения, функция которых заключается в обеспечении удобства восприятия и трактовки диагностических данных. Поэтому при интерпретации Т-баллов не стоит переоценивать численные значения нормализованных показателей. Например, если у одного испытуемого по диагностической шкале Т=55, а другого по этой же шкале Т=60, то это совсем не означает, что у первого диагностируемое свойство имеет меньшую выраженность, чем у второго. Оценка значений Т-баллов проводится по диапазонам, эквивалентным шкале стандартных отклонений. Еще раз отметим, что преимущество Т-баллов состоит в возможности более удобного и наглядного представления результатов, например, в виде графика.

Преобразование в шкалу Т-баллов нашло применение в ряде широко используемыхвклиникеопросников, например, Миннесотском мнгогофазном личностном опроснике (MMPI).

Основным недостатком преобразования Z-оценки в Zt-показатель является привязка оценки полученных диагностических результатов к нормативным данным, точнее говоря, к среднему значению и среднему квадратичному отклонению нормативной выборки. Поскольку получить полностью репрезентативную нормативную выборку крайне трудно, нормативные данные чаще всего отражают распределение диагностируемого свойства не в популяции в целом, а лишь в выборке испытуемых, взятой для проведения нормализации. Следует учитывать, что выборканормализации может значительно отличаться от популяции, представителем которой является данный конкретный испытуемый. В результате некорректного перевода первичных оценок в стандартизированныеможетзначительно снизиться валидность и достоверность полученных диагностических данных.

С целью устранения указанного выше недостатка предложены способы перевода в стандартизированные показатели, не зависящие от выборки стандартизации. Такой способ нормализации первичных оценок используется в технологии анализа тестовых заданий . В этой технологии нормализация сырых оценок осуществляется не на основе описательной статистики, а с помощью метода максимального правдоподобия с логарифмическимшкалированием.

Способ перевода в Т-баллы на основе теории анализа тестовых заданий показал достаточно высокую эффективность в ряде психодиагностических методик в клинике.