Penilaian sistem imun dilakukan oleh seorang siswa. Penilaian personel otomatis di Perusahaan M8 (implementasi) Karakteristik utama objek penilaian

Hitungan

Penentuan jumlah limfosit T ( CD 3+) dengan metode roset imun dalam sediaan jadi

Prinsip metode ini: Pada tahap 1, limfosit diisolasi dari darah menggunakan sentrifugasi gradien kepadatan. Pada tahap 2, dengan menggunakan reaksi roset dengan eritrosit domba, persentase limfosit T dari jumlah total limfosit ditentukan. Reaksi pembentukan roset didasarkan pada adanya reseptor pada permukaan limfosit T yang mampu mengikat sel darah merah domba. Ketika eritrosit domba ditambahkan ke suspensi limfosit, limfosit tersebut diserap oleh limfosit T, dan struktur yang dihasilkan disebut mawar. Jumlah total limfosit dihitung di bawah mikroskop berdasarkan jumlah mawar.

Penilaian kualitatif (fungsional).

1. Penilaian kemampuan berkembang biak pada reaksi transformasi ledakan limfosit

Prinsip metode ini: Limfosit T, di bawah pengaruh biostimulan tertentu, misalnya fitohemaglutinin (PHA) dalam kultur in vitro, mampu berubah menjadi sel besar seperti ledakan dengan inti longgar dan sitoplasma basofilik, yang secara aktif mensintesis DNA.

2. Penentuan jumlah t-suppressor, t-helpers dan killer t-cell pada reaksi imunofluoresensi (rif)

Prinsip metode ini: Suspensi limfosit diobati dengan antibodi monoklonal terhadap penanda CD dari subpopulasi limfosit T individu, dan kemudian dengan serum antiglobulin berlabel fluorokrom. Penghitungan sel fluoresen dilakukan di bawah mikroskop fluoresensi (FIF dua tahap).

Status imunologi Tes tingkat pertama

Sumber informasi: O.K. Pozdeev "Mikrobiologi medis" diedit oleh acad. RAMS V.I. Pokrovsky (Moskow, 2001)

Tes tingkat kedua (analitis)

Penentuan subpopulasi limfosit T (T-helper, T-suppressor, T-killer).

Penilaian aktivitas proliferasi limfosit T dan B (reaksi transformasi ledakan).

Penentuan migrasi spontan leukosit dan uji penghambatan migrasi leukosit.

Penentuan limfosit yang membawa imunoglobulin permukaan dari berbagai kelas (limfosit B).

Penentuan mediator sistem imun.

Tes kulit hipersensitivitas tertunda.

PELAJARAN No.16

SUBJEK: PELAJARAN AKHIR PADA BAGIAN “IMUNOLOGI MEDIS TEORITIS DAN TERAPAN”

DAFTAR PERIKSA

Mikroflora tubuh manusia . Mikroflora manusia normal (residen). Pembentukan dan perkembangan mikroflora normal. Fungsi mikroflora normal.

Dysmicrobiocenosis (dysbacteriosis), penyebab, jenis, prinsip koreksi.

Konsep infeksi. Definisi, ciri-ciri umum. Perbedaan penyakit menular dan penyakit tidak menular.

Peran mikroorganisme dalam proses infeksi. Dosis menular. Metode infeksi. Gerbang masuk. Patogenisitas dan virulensi. Kontrol genetik terhadap patogenisitas dan virulensi. Faktor yang meningkatkan dan menurunkan virulensi mikroba.

Faktor patogenisitas. Metode untuk menentukan virulensi, satuan. Mikroorganisme patogen obligat dan patogen kondisional.

Toksisitas dan toksigenisitas mikroorganisme. Endotoksin, sifat, produksi, aplikasi. Eksotoksin, sifat, produksi, satuan pengukuran. Jenis eksotoksin, mekanisme kerjanya.

Peran makroorganisme dalam perkembangan dan perjalanan penyakit menular. Faktor keturunan. Keadaan anatomi dan fisiologis tubuh. Peran kondisi kehidupan dalam perkembangan dan perjalanan penyakit menular.

Dinamika proses infeksi, ciri-cirinya.

Metode penelitian biologi, tahapan, evaluasi. Hewan laboratorium. Metode infeksi.

Faktor dan mekanisme resistensi nonspesifik. sifat penghalang dan antimikroba pada kulit, selaput lendir, kelenjar getah bening, jaringan tidak responsif, mikroflora normal.

Faktor humoral perlindungan nonspesifik: peptida antibiotik endogen, properdin, lisozim, b-lisin, fibronektin, protein fase inflamasi akut.

Interferon. Kelompok interferon menurut produsen, jenis IFN menurut metode pembentukannya. Mekanisme kerja interferon.

Sistem pelengkap. Struktur. Jalur aktivasi (klasik, alternatif). Aktivator sistem komplemen. Inhibitor dan inaktivator dari kaskade komplementer. Fungsi biologis komponen komplemen yang diaktifkan. Anafilatoksin, peran biologisnya. Kompleks serangan membran. Metode untuk menentukan aktivitas sistem komplemen.

Fagosit polimorfonuklear dan mononuklear (asal, karakteristik, fungsi). Reaksi fagositik (fase, mekanisme dan faktor aktivitas bakterisida intraseluler). Hasil fagositosis.

Indikator fagositosis dan metode penentuannya.

Pembunuh alami. Mekanisme pengenalan sel target dan sitolisis.

Antigen: definisi, prinsip struktur, sifat antigen. Klasifikasi antigen. Kelompok, spesies, varian, antigen stadium. Antigen silang. Mimikri antigenik. Antigen bakteri. Sifat antigenik jamur.

Limfosit B: perkembangan, penanda. Reseptor sel B: struktur (daerah konstan dan variabel, rantai polipeptida). Mekanisme aktivasi sel B. Fungsi limfosit B.

Antibodi. Struktur molekul imunoglobulin: daerah variabel dan konstan, lokasi dan struktur domain. Situs pengikatan antigen.

Antitelogenesis, dinamika sintesis antibodi. Antibodi poliklonal dan monoklonal

Kelas dan subkelas imunoglobulin, isotipe, alotipe, idiotip. Sifat biologis imunoglobulin

Mekanisme interaksi antibodi dengan antigen. Valensi, afinitas dan aviditas antibodi. Reaksi silang. Antibodi lengkap dan tidak lengkap. Kompleks imun.

Efek biologis dari interaksi antibodi dengan antigen: aktivasi komplemen, netralisasi racun dan virus, lisis, aglutinasi dan opsonisasi mikroorganisme, penghambatan adhesi, invasi, penekanan reaksi fagositik.

Reaksi Coombs langsung dan tidak langsung. Imunodifusi radial sederhana pada agar Mancini.

Limfosit T: perkembangan, penanda. Subpopulasi limfosit T (T-helper zero, T-helper tipe 1, 2, T-regulator; T-effectors: limfosit T sitotoksik, limfosit T memori).

Reseptor sel T: struktur, jenis, kontrol genetik, keanekaragaman. Peran reseptor sel T. Antigen yang bergantung pada T.

Respon imun seluler, dinamika perkembangan, target aksi T-killer, manifestasi.

Metode penelitian serologis: tugas, tahapan, penilaian. Klasifikasi umum metode diagnostik imunologi: serotipe, serodiagnosis

Diagnostikum. Serum imun diagnostik. Metode untuk mendapatkannya. Sistem pengujian dan serum diagnostik polivalen, monoreseptor teradsorpsi (poliklonal) dan monoklonal.

Penilaian kualitatif dan kuantitatif reaksi serologis: titer serum imun, titer diagnostik, peningkatan titer antibodi, afinitas dan aviditas antibodi.

Mekanisme perjalanan dan manifestasi reaksi aglutinasi. Memuat reaksi aglutinasi: mengatur dan memperhitungkan reaksi hemaglutinasi tidak langsung (IRHA), aglutinasi lateks. Reaksi ko-aglutinasi. Evaluasi hasil.

Reaksi imunopresipitasi: pilihan untuk menentukan stadium. (Pengendapan cincin Ascoli, difusi ganda dalam agar, imunoelektroforesis), metode akuntansi dan evaluasi.

Reaksi netralisasi toksin dengan serum antitoksik.

Reaksi lisis imun dan fiksasi komplemen: metode penentuan stadium, pencatatan dan evaluasi, penerapan dalam diagnosis penyakit menular.

Reaksi imunofluoresensi. Nilai diagnostik, kandungan informasi, pilihan pementasan reaksi: langsung dan tidak langsung.

Uji imunosorben terkait. Opsi pementasan. Kemungkinan kesalahan dan keterbatasan metode, enzim immunoassay.

Imunoblotting (Western blotting). Melaksanakan dan mencatat hasilnya. Varian penerapan metode.

Radioimmunoassay, esensi, metode pemberian, metode pencatatan dan evaluasi reaksi, kelebihan dan kekurangan metode.

Alergi, definisi, tahapan alergi. Alergen. Rumah tangga, serbuk sari, epidermis, makanan, bahan kimia, obat-obatan, eksoalergen mikroba. Cara masuknya alergen ke dalam tubuh. Endoalergen.

Hipersensitivitas langsung (IHT). Jenis mediator HNT (I). Syok anafilaksis, mekanisme perkembangan. Atopi, mekanisme perkembangan, bentuk klinis. Tipe sitotoksik HNT (II). Tipe kompleks imun HNT (III).

Hipersensitivitas tipe tertunda (DTH, IV). Alergi kontak. Alergi menular.

Metode untuk mendiagnosis penyakit alergi. Tes kulit. Tes yang provokatif. Tes eliminasi. Metode diagnostik alergi in vitro - penentuan IgE antigen spesifik dan antigen nonspesifik.

Prinsip umum pencegahan dan pengobatan penyakit alergi spesifik dan nonspesifik. Melakukan vaksinasi alergi spesifik. Pencegahan penyakit alergi di tempat kerja, di rumah, dan saat memberikan perawatan medis

Imunoprofilaksis pasif. Definisi. Serum imun dan imunoglobulin. Jenis dan cara memperolehnya. Indikator aktivitas. Indikasi untuk digunakan.

Imunoterapi. Definisi. Obat untuk imunoterapi. Mekanisme aksi. Indikasi untuk digunakan. Komplikasi imunoprofilaksis dan imunoterapi.

Status kekebalan tubuh. Karakteristik status kekebalan populasi dan usia. Indikator dan metode penentuan dan evaluasi.

Imunogram. Indikasi untuk meresepkan imunogram. Aturan dasar untuk menafsirkan imunogram. Prinsip diagnosis imunologi.

Defisiensi imun: herediter dan didapat. Sindrom klinis.

Penyakit autoimun. Mekanisme pembangunan. Bentuk klinis. Autoantigen.

Imunitas antitumor. Konsep pengawasan kekebalan tubuh. Karakteristik antigen tumor. Mekanisme eliminasi sel tumor di bawah pengaruh limfosit sitotoksik dan sel pembunuh alami. Tipe respon imun humoral terhadap antigen tumor, berperan dalam imunitas antitumor. Mekanisme tumor lolos dari pengawasan kekebalan.

imunitas transplantasi. Jenis cangkok. Antigen transplantasi. Kondisi berkembangnya reaksi penolakan transplantasi imun dan mekanismenya. Metode menekan reaksi transplantasi Komplikasi.

Kesimpulan analitis berdasarkan hasil penilaian status imun. Konsistensi dengan tes laboratorium lainnya.

Ciri-ciri perubahan status kekebalan pada berbagai kondisi imunopatologis: imunodefisiensi primer dan sekunder, penyakit autoimun spesifik organ dan nonspesifik organ, penyakit alergi, tumor.

Subpopulasi: sel T pembantu (Th 0, Th 1, Th 2, Th 17), sel T pengatur CD 4+ (Treg, Tr 1, Th 3), CD 4+ CD 25+ Fox. Sel T sitotoksik P 3+ (CTL), CD 8+

Kerugian dari metode biologis: ◦ Membutuhkan banyak tenaga kerja dan sulit diterapkan; ◦ Memerlukan waktu yang jauh lebih lama untuk mendapatkan hasil akhir, serta kondisi steril khusus dan peralatan untuk pementasan; ◦ Kurang spesifik dibandingkan metode imunokimia. Keuntungan: Mereka dibedakan oleh sensitivitas yang cukup tinggi; Dari sudut pandang biologis, metode ini lebih tepat karena hanya mengukur bentuk sitokin yang aktif secara biologis. Semua metode penilaian aktivitas biologis sitokin in vitro dapat digabungkan menjadi 5 kelompok utama: Metode biologis

Metode untuk menilai aktivitas biologis sitokin; Metode imunokimia; Metode biologi molekuler. Studi tentang sistem sitokin dilakukan pada berbagai tingkatan tergantung pada tugas tertentu dan mencakup pendekatan utama berikut: Analisis genetik untuk menentukan tidak adanya mutasi pada gen sitokin, reseptornya, dan protein sistem sinyal intraseluler yang memicu sintesis dan sinyal. penularan; Analisis polimorfisme gen sitokin; Studi ekspresi gen sitokin; Mempelajari tingkat produksi sitokin oleh sel-sel dalam kultur; Penentuan konsentrasi sitokin dalam cairan biologis; Studi sintesis sitokin pada tingkat sel individu; Studi sintesis sitokin dalam jaringan. Metode untuk menilai fungsi sistem sitokin

Analisis pada tingkat sel produser (sel mononuklear, limfosit, leukosit, makrofag, DC, dll.) Tingkat gen - Studi gen yang bertanggung jawab untuk sintesis sitokin dan polimorfismenya menggunakan metode berbasis PCR. - Identifikasi adaptor dan molekul lain yang mengirimkan sinyal yang memicu transkripsi gen sitokin (PCR, immunoblotting, dll). Tingkat sel - Identifikasi dan penentuan jumlah sel (Th 1, Th 2, limfosit T pengatur) yang mengandung sitokin (menggunakan metode pewarnaan sitokin intraseluler). - Menghitung jumlah sel yang mensekresi sitokin yang dianalisis (metode ELISPOT). Analisis sitokin terlarut dan antagonisnya dalam media biologis tubuh - Penentuan sitokin secara kuantitatif menggunakan ELISA. - Menguji aktivitas biologis sitokin pada berbagai model (garis sel, sel target, dll). - Pewarnaan imunohistokimia sitokin dalam jaringan. - Penentuan rasio sitokin yang berlawanan (misalnya pro dan antiinflamasi), serta sitokin dan antagonisnya. Penentuan pengaruh sitokin pada sel target - Deteksi ekspresi reseptor sitokin dan gennya (flow cytofluorimetry, PCR). - Analisis molekul yang terlibat dalam transmisi sinyal dari reseptor sitokin di sel target (PCR, immunoblotting). - Analisis fenotipe dan aktivitas fungsional sel target setelah aksi sitokin spesifik pada sel tersebut (aliran sitofluorometri, metode pengujian biologis) Analisis komprehensif sistem sitokin mencakup beberapa tahap yang berurutan

◦ Penilaian aktivitas proliferasi sel (stimulasi atau penekanan); ◦ Penilaian sitotoksisitas; ◦ Penentuan ekspresi reseptor membran, sintesis sitokin lain, dll. ◦ Menilai efek terhadap aktivitas fungsional sel (yang selalu bergantung pada jenis sel dan sitokin yang dipelajari, misalnya menilai kemotaksis atau menilai penyelesaiannya fagositosis); ◦ Evaluasi efek anti infeksi, seperti pada kasus interferon. 1. Metode biologis

IL 1 ditentukan dalam kultur monosit yang distimulasi dengan LPS. Tikus dari garis keturunan C 3 H/He digunakan. J Timosit tikus ini distimulasi oleh mitogen (concanavalin A = Con. A, fitohemagglutinin = PHA) dan merespons IL 2 dan mitogen Metode: pengenceran serial 2 X dari suspensi timosit dalam media khusus dan sampel kontrol; pengenceran dipindahkan ke pelat 96-sumur dan diinkubasi; kemudian label ditambahkan pada kultur sel dan pencantuman label ditentukan dengan counter.KS = M av (sampel)/Ms (kontrol), Ms adalah rata-rata jumlah impuls dalam tiga sumur.Jika KS 3, IL 1 aktif (dengan keyakinan tinggi) Penentuan aktivitas biologis IL 1

Sel yang digunakan: sel fibroblas embrio ayam dan manusia, sel fibroblas diploid manusia kontinu, kultur sel L-929 Virus yang digunakan: virus ensefalomielitis tikus (MEV), virus stomatitis vesikuler tikus Metodologi: kultur sel dalam medium ditambahkan ke pelat 96-sumur dan diinkubasi untuk pembentukan lapisan tunggal; Selanjutnya sampel uji dititrasi dengan pengenceran 2X pada monolayer; ke sampel + HEM dan menginkubasinya.Tingkat aktivitas IFN ditentukan oleh nilai kebalikan dari pengenceran maksimum sampel.Penentuan aktivitas biologis IFN

Untuk IL-2, digunakan garis sel murine HT 2. IL-2 ditentukan oleh kemampuannya untuk: 1) mendukung pertumbuhan limfoblas T yang distimulasi oleh mitogen 2) mendukung pertumbuhan jangka panjang dari sel T yang bergantung garis dalam kultur CTLL (garis limfosit T sitotoksik) IL-4 dapat meningkatkan sintesis DNA dalam sel B yang distimulasi untuk berkembang biak oleh antibodi anti-Ig. M. Bioassay untuk penentuan I-2 dan IL-4.

Indeks sitotoksik: CI = ((a b) a) 100% (a – jumlah sel hidup pada kontrol, b – jumlah sel hidup pada percobaan) Metode ini menggunakan 2 kontrol: Ø Positif – TNF rekombinan Ø Negatif – sel dalam media kultur Aktivitas bersyarat TNF – nilai pengenceran terbalik sampel yang diperlukan untuk memperoleh 50% sitotoksisitas seluler Penentuan aktivitas biologis TNF

Metode penentuan kuantitatif konsentrasi sitokin terlarut dalam berbagai cairan biologis: Uji imunosorben terkait enzim dalam berbagai modifikasi (ELISA) Radioimmunoassay (RIA) Analisis multifaktor Untuk menganalisis ekspresi sitokin dan reseptornya pada membran sel, serta produksinya sitokin oleh sel dalam kultur dan jaringan: 1. Metode sitofluorometri – untuk menganalisis ekspresi molekul permukaan sel (bentuk membran sitokin dan reseptor sitokin) dan menentukan sitokin dalam sitoplasma sel. 2. Metode penilaian produksi sitokin oleh sel tunggal dalam kultur (ELISPOT). 3. Imunositokimia dan imunohistokimia - untuk menilai kandungan sitokin dalam sitoplasma sel pada apusan dan bagian jaringan. 2. Metode imunokimia

Kebanyakan sistem uji immunoassay enzim diadaptasi untuk bekerja dengan cairan biologis apa pun. Serum atau plasma digunakan untuk mengukur kadar sitokin pada tingkat sistemik. serum darah Biasanya konsentrasinya berada pada batas sensitivitas metode enzim immunoassay; lebih tepat untuk mengukur kadarnya dalam jaringan yang menarik bagi peneliti atau dalam cairan biologis (cairan air mata, cairan kantong gusi, bilasan dari gigi berlubang, urin, cairan serebrospinal). metode imunokimia cair

Kadar cairan Tetramethylbenzidine Streptavidin peroxidase Antibodi kedua terkonjugasi biotin Sumur Pelat Sitokin Penilaian sekresi IFN g dengan ELISPOT

Prinsip pengoperasian sebagian besar sistem pengujian modern adalah menggunakan versi “sandwich” dari uji imunosorben terkait-enzim. Sangat spesifik; Cepat (waktu tes ELISA kurang dari 5 jam) Relatif mudah dilakukan; Ambang sensitivitasnya mencapai 0,5 pkg/ml.

Metode RIA mirip dengan ELISA, tetapi menggunakan isotop radioaktif berlabel. Sensitivitas RIA cukup tinggi, namun belakangan ini metode tersebut sudah jarang digunakan. Untuk menilai tingkat sitokin, modifikasi lain dari ELISA standar menggunakan fluoresensi juga digunakan. Alih-alih substrat berwarna, substrat enzim peroksidase diambil, yang mengubah fluoresensi di bawah aksi enzim (misalnya, luminol). Uji radioimuno.

Keuntungan metode ini: Analisis simultan hingga 100 sitokin dalam satu sampel Pengurangan berulang kali dalam volume sampel uji Peningkatan reproduktifitas hasil Menghemat waktu, mengurangi biaya penelitian dan biaya tenaga kerja Analisis multifaktor

Analisis multifaktor Immunoassay tipe sandwich, di mana antibodi terikat pada permukaan mikropartikel (microbeads, microchip) Prinsip serupa dengan ELISA Mikropartikel dengan berbagai ukuran (diameter 4,4 dan 5,5 µm) Masing-masing jenis mikropartikel dapat diidentifikasi dengan membedakan intensitas fluoresensi dan ukuran

Prinsip metode ini: ◦ Antibodi pertama diserap pada microbeads; antibodi kedua dapat diberi label dengan fluorokrom berbeda atau label lain, sehingga kadar beberapa sitokin dapat diukur sekaligus; ◦ Lebih lanjut, prinsip reaksinya mirip dengan ELISA standar pada pelat Antibodi kedua diberi label sitokin fluorescein Antibodi pertama microbead Analisis multifaktor

Cara penentuan sintesis sitokin oleh sel terisolasi: (0,6 ml) Darah vena segar diambil dalam wadah berisi heparin - aduk rata dan encerkan 5 kali dengan medium RPMI 1640 (2,4 ml) - tambahkan 2 m M glutamin dan 80 g/ ml gentamisin. Sediaan LPS pada konsentrasi 1-10 μg/ml dapat digunakan sebagai penginduksi sintesis sekelompok sitokin proinflamasi (IL-1, IL-6, TNF), IL-10, IFN- dan kemokin. PHA (50 μg/ml) dapat berfungsi sebagai penginduksi sintesis IL-2, IL-4, IFN-γ dan sitokin sel T lainnya. 1. penginduksi 2. darah encer 37 o. C, 5% CO 2 mempelajari kandungan pemilihan supernatan sitokin dalam uji imunosorben biologis atau terkait enzim 24 jam.Pada pasien, jumlah leukosit dan jumlah darah dihitung menggunakan metode standar. Data yang diperoleh dihitung ulang per 1 juta leukosit atau sel mononuklear, limfosit atau sel lain yang diinginkan dalam 1 ml darah (dengan memperhitungkan pengenceran). 3. Penentuan produksi sitokin oleh sel

Penentuan reseptor dan bentuk membran sitokin Penentuan sitokin intraseluler ◦ Memblokir metabolisme sel ◦ Fiksasi sel ◦ Permebialisasi membran sel (saponin digunakan dalam kombinasi dengan reverse transport blocker (Brefeldin A atau monensin) untuk mencegah ekskresi antibodi dari sitoplasma sel). Studi produksi sitokin oleh sel menggunakan flow cytometry

Dapat memberikan informasi tambahan tentang keadaan imunitas lokal Metode imunohistokimia menggunakan antibodi poliklonal atau monoklonal spesifik terhadap sitokin Sitokin dapat dideteksi dalam sitoplasma sel pada apusan suspensi sel; potongan jaringan biasanya dibekukan dalam, kemudian bagian dengan ketebalan 4-6 mikron disiapkan dalam cryostat (- 20 o. C) 4. Penentuan kadar sitokin dalam jaringan

Metode imunohistokimia tidak langsung: ◦ Studi lokalisasi sitokin dalam sel; menggunakan antibodi spesifik terhadap sitokin ◦ Pada tahap kedua, antibodi anti-spesies digunakan, diberi label dengan fluorokrom (untuk mikroskop fluoresen), (sitokin sitoplasma dan bentuk membrannya dapat dideteksi) atau enzim (untuk mikroskop cahaya) Dalam dalam kasus enzim, antibodi anti-spesies yang terbiotinilasi digunakan, dan pada tahap terakhir, streptavidin peroksidase atau streptavidin alkaline fosfatase. Penentuan kadar sitokin dalam jaringan

Penentuan ekspresi gen sitokin melalui akumulasi mRNA; Probe oligonukleotida spesifik (dari beberapa nukleotida ke seluruh DNA sesuai dengan gen sitokin yang diinginkan) Saat menggunakan metode hibridisasi in situ pada cryosection jaringan segar atau apusan sel untuk mendeteksi lokalisasi sitokin mRNA, probe RNA komplementer dapat digunakan untuk RNA hibridisasi. 5. Metode biologi molekuler untuk mempelajari sitokin

Saat menggunakan metode hibridisasi in situ pada cryosection jaringan segar atau apusan sel, probe RNA komplementer untuk hibridisasi RNA dapat digunakan untuk mendeteksi lokalisasi sitokin mRNA. metode ini memungkinkan Anda untuk menentukan jumlah dan jenis sel; keberadaan m RNA tidak selalu mencerminkan keberadaan sitokin di dalam sel; kombinasi metode diperlukan untuk menilai ekspresi m RNA dan sintesis sitokin ini Hibridisasi in situ untuk mengidentifikasi sel yang mengandung IL-1βm RNA di antara sel mononuklear darah manusia

RT-PCR(transkripsi terbalik); PCR waktu nyata; Metode microarray (memungkinkan Anda menganalisis beberapa ratus gen secara bersamaan) Penggunaan aptamers Metode biologis molekuler untuk mempelajari sitokin

Aptamers adalah oligonukleotida yang diperoleh dengan menggunakan teknologi SELEX. Digunakan untuk penilaian kuantitatif tingkat sitokin, termasuk dalam modifikasi ELISA, di mana aptamers digunakan sebagai pengganti antibodi sebagai molekul yang mengenali sitokin.

Perubahan rasio sel yang memproduksi berbagai sitokin mungkin mencerminkan patogenesis penyakit dan berfungsi sebagai kriteria prognosis penyakit dan evaluasi terapi. Metode pewarnaan intraseluler digunakan untuk menentukan ekspresi sitokin pada tingkat sel tunggal. Flow cytometry memungkinkan Anda menghitung jumlah sel yang mengekspresikan sitokin tertentu. 6. Pewarnaan intraseluler

Ada beberapa keterbatasan: ü dengan bantuannya tidak mungkin menganalisis sintesis sitokin oleh satu sel, ü tidak mungkin menentukan jumlah sel penghasil sitokin dalam suatu subpopulasi, ü tidak mungkin menentukan apakah sel penghasil sitokin sel mengekspresikan penanda unik, ü apakah sitokin yang berbeda disintesis oleh sel yang berbeda atau oleh sel yang sama.

Disregulasi bawaan PID yang bergantung pada sitokin: cacat herediter pada gen rantai gamma dari reseptor IL-2 (penghapusan AKO 62, 81) SCID terkait-X (ditandai dengan tidak adanya penurunan kandungan Tlf dan penurunan tajam dalam kandungan Tlf indikator imunitas seluler dan humoral) Defisiensi subunit alfa IL-7 SCID ( penurunan jumlah TLF, tetapi indikator VLF, NK normal) Gangguan pada sistem IL-12, 23, IFNg dan R-nya meningkatkan kerentanan terhadap infeksi yang disebabkan oleh mikobakteri dan salmonella, Listeria monocytogenes. 7. Peran sitokin dalam patogenesis penyakit

SNP (polimorfisme nukleotida tunggal) merupakan penanda diagnostik penting yang ditentukan oleh MBM, karena EO tidak dihilangkan dan tetap berada dalam populasi. Gen TNF: substitusi -308(GA) dan -238(GA) pada wilayah yang tidak diterjemahkan pada wilayah promotor. Menghasilkan peningkatan produksi TNF sebanyak 2-5 kali lipat. Penyakit ini 4 kali lebih sering terjadi pada pasien dengan malaria serebral berat, 7-8 kali lebih sering terjadi pada pasien dengan gangguan NS berat.Polimorfisme fungsional gen TCA.

Artritis reumatoid adalah lesi pada membran sinovial, tulang rawan, dan jaringan tulang sendi. Pada pasien dengan RA, DC dan MF plasmacytoid dan myeloid ditemukan di sinovium, yang mensintesis berbagai TCA yang mampu menginduksi diferensiasi TLF naif. Mediator utamanya adalah TNF dan IL 1. TNF menyebabkan aktivasi fungsional fibroblas sinovial, sel endotel dan daya tarik limfosit, sintesis siklus TCA, peradangan dan remodeling jaringan sendi. Mengganggu metabolisme lipid, menyebabkan cachexia. IL-6 merangsang sintesis protein fase akut di hati. Berperan dalam perkembangan patologi autoimun

Pada pasien PC, jumlah klon TLF yang mensintesis IL-3, 4, 5, 6, dan TNF lebih tinggi. Asma bronkial - IL 4, 5, 13 (Th2) Deteksi IFNg dalam darah tali pusat dikaitkan dengan rendahnya risiko terkena asma. Penentuan tingkat dan produksi TCA pada anak kecil dapat menjadi elemen diagnostik penting untuk mengidentifikasi kecenderungan alergi. TTC dan alergi

TCB berfungsi sebagai target penting untuk imunodiagnosis banyak penyakit. Mempelajari tingkat TCA memungkinkan seseorang memperoleh informasi tentang aktivitas fungsional berbagai sel imunokompeten, tingkat keparahan peradangan, transisinya ke tingkat sistemik dan prognosis, serta hubungan antara proses aktivasi Tx. Menilai fungsi sistem saraf pusat memungkinkan pendekatan baru untuk mempelajari keadaan IS tubuh dalam praktik klinis. Kesimpulan

Perkembangan limfosit T terjadi di organ pusat kekebalan - kelenjar timus (F. Burnet, 1971). Di antara timosit, ada tiga populasi independen yang dibedakan: T-helper (penolong), T-suppressor (penekan) dan T-effectors. Tipe keempat dari timosit - pembunuh (pembunuh) terakumulasi di bawah pengaruh stimulasi antigenik dari efektor-T dan dengan demikian melengkapi reaksi imun tipe seluler. Yang paling penting saat ini adalah hubungan antara T-helper dan T-suppressor, yang memiliki kemampuan untuk menghambat dan menghentikan produksi antibodi, memberikan toleransi imunologis (L.N. Fontalin, L.A. Pevnitsky, 1978, dll.).

Untuk menentukan aktivitas fungsional sistem T metode berikut digunakan: penghitungan limfosit T yang bersirkulasi, reaksi transformasi ledakan limfosit (RBTL), reaksi penghambatan migrasi limfosit (RIML), pembentukan sel roset spontan (E ROK), sensitivitas limfosit terhadap kortisol, tes sitotoksik penggunaan antisera terhadap limfosit T, penentuan aktivitas fungsional penekan T, dll. (A. N. Cheredeev, 1976, dll.). Metode yang paling informatif adalah RBTL dan E-ROK.

Metode RBTL didasarkan pada fakta bahwa limfosit T dalam media nutrisi, di bawah pengaruh stimulator fotohemagglutinin (PHA), mereka dapat berubah (berubah) menjadi sel germinal yang tidak berdiferensiasi (ledakan). Diasumsikan hal ini terjadi karena pelepasan enzim lisosom dan penghancuran RNA.Semakin menarik terjadinya transformasi limfosit menjadi ledakan, semakin aktif dan lengkap sistem T (O. I. Epifanova et al., 1977).

Ada dua metode untuk menentukan RBTL: morfologi dan isotop. Metode yang paling menjanjikan adalah metode isotop, berdasarkan penentuan blettransformacin dengan memasukkan timidin (Iz) berlabel ke dalam DNA limfosit (I. N. Braude, 1969; P. G. Nazarov, V. I. Purin, 1975, dll.). Hasilnya dinyatakan dalam indeks stimulasi.

Berdasarkan S.K.Yevtushenko(1980), pada donor norma RBTL dengan FHA adalah 61,71 ± 9,72 (kisaran indeks stimulasi setelah 72 jam inkubasi adalah 18,36 hingga 231,24), yang mendekati data literatur (A I. Evseeva et al. , 1976). Untuk menilai spesifisitas sensitisasi limfosit T oleh antibodi anti-otak, alih-alih PHA, kami menambahkan 1 tetes ekstrak garam air antigen otak (MAG), yang dibuat dari berbagai bagian otak, ke dalam campuran yang diinkubasi, memiliki sebelumnya menentukan aktivitas mitogeniknya (yaitu, kami menemukan jumlah minimum antigen yang menyebabkan transformasi ledakan limfosit). Secara paralel, pengendalian dilakukan tanpa PHA, MAG dan antigen lainnya.

Reaksi pembentukan sel T berbentuk roset secara spontan didasarkan pada pembentukan mawar dari limfosit T dan eritrosit domba (E-ROC), yang merupakan indikator (penanda) limfosit T (M Jondal et al., 1972). Dalam sediaan terbatas, persentase limfosit pembentuk roset dihitung di antara semua jenis leukosit. Norma E-ROK, menurut data kami, adalah (51,0+9,7)%, yang juga mendekati data literatur (S.I. Donskoe et al., 1975, dll.).

Persentase rendah pembentukan limfosit roset berbicara tentang penurunan aktivitas limfosit T, dan jika berkurang tajam, maka ini menunjukkan keadaan imunodefisiensi (R. Hong, 1977, dll.), yang memerlukan koreksi imunostimulan yang tepat.

Upaya sedang dilakukan menggolongkan kerusakan sistem saraf akibat alergi (S.I. Kaplai, 1967; Ya.V. Medvedev, 1968; W. Wilson, 1967, dll). Secara khusus, F. Speer (1967) mengusulkan untuk menggabungkan keragaman semua bentuk klinis patologi ini ke dalam konsep umum “neuroalergy”. Sejumlah penulis menganggap gangguan sistem saraf pada alergi sebagai bagian dari proses alergi umum (N.K. Bogolepov, S.I. Kaplan, 1971; B.S. Agte, S.K. Evtushenko, 1974; J. Blamantier, S. Denimal, 1966, dll.).

Berikutnya kami riset(B.S. Agte, S.K. Evtushenko, 1976, 1980) juga mengkonfirmasi kesimpulan ini, dan oleh karena itu kami secara kondisional menyebut manifestasi neurologis alergi dalam praktik klinis sebagai neuroallergopati.

Perkembangan SDM -merek melalui penilaian personel di perusahaan M8,
atau Bagaimana berkembang dengan senang hati

Jadi, kita telah sampai pada tahap akhir penilaian personel di M8 Corporation. Izinkan saya mengingatkan Anda bahwa penilaian dilakukan sepenuhnya secara otomatis: bersama pemrogram perusahaan, kami secara khusus mengembangkan antarmuka untuk menilai dan menyajikan hasilnya.

Evaluasi terhadap karyawan terdiri dari penilaian parameter kualitatif (kesesuaian perilaku karyawan dengan standar perilaku di perusahaan) dan kuantitatif (indikator kualitas bisnis dan pengetahuan profesional).

Pengembangan alat untuk penilaian 360°
Kepatuhan karyawan terhadap standar perilaku perusahaan dinilai dengan menggunakan metode 360°. Akan lebih tepat disebut metode 270°, karena... Karyawan tidak dinilai oleh klien. Kami tidak mengubah format penilaian, namun kami mengubah konten, dengan mengutamakan validitas dan meminimalkan subjektivitas dalam penilaian. Untuk setiap kualitas yang dinilai (korporatisme, orientasi tim, kepemimpinan, fokus pelanggan, orientasi prestasi, ketahanan terhadap stres, non-konflik dan motivasi kerja) dilakukan prosedur konseptualisasi dan operasionalisasi.

1. Harapan manajemen terhadap karyawannya telah diklarifikasi.
2. Contoh perilaku spesifik dari manifestasi masing-masing kualitas telah ditentukan, sesuai dengan konten pekerjaan karyawan di perusahaan.

Sekarang menilai seorang karyawan untuk setiap kualitas terdiri dari memilih satu dari lima contoh perilaku yang paling sesuai dengan perilakunya. Contoh perilaku dirumuskan sedemikian rupa untuk mengecualikan karakteristik yang jelas-jelas negatif. Setiap contoh diberi skor (disembunyikan bagi evaluator). Dengan penilaian baru, contoh perilaku untuk setiap kualitas diacak dalam program, dan evaluator tidak memiliki kemampuan untuk secara otomatis memilih peringkat “terendah” atau “tertinggi”, karena karakteristik ditampilkan dalam daftar secara tidak berurutan.

Dalam foto: ruang pertemuan M8 Corporation

Contoh (Penilaian Orientasi Tim)
instruksi :Pilih dari opsi yang diusulkan hanya satu item yang paling mencirikan orang yang sedang Anda evaluasi.
Opsi Fitur :
1. Lebih suka melakukan pekerjaan secara mandiri. Jika pekerjaan tidak sepenuhnya berhasil, maka hanya manajemen yang diajak berkonsultasi. Tidak fokus membantu rekan kerja, mereka jarang meminta nasihat darinya. Memilih untuk tidak mendiskusikan keputusannya dengan rekan kerja.
2. Diskusikan dengan rekan kerja hanya keputusan-keputusan yang secara langsung mempengaruhi mereka. Dia bisa membantu masalah pekerjaan jika Anda berpaling padanya, tapi dia melakukannya dengan enggan.
3. Saat melaksanakan tugas yang diberikan, ia tidak hanya fokus pada kebutuhannya sendiri, tetapi juga memperhatikan kebutuhan rekan-rekannya. Memperhatikan pendapat rekan kerja saat mengambil keputusan. Saya siap membantu karyawan dengan nasehat jika berkaitan dengan pemenuhan tujuan profesionalnya.
4. Siap membantu ketika rekan kerja meminta bantuan, meskipun tidak berkaitan dengan tujuan profesionalnya. Siap mendiskusikan keputusan Anda dengan karyawan dan mengubah keputusan demi kepentingan tim.
5. Ia tidak hanya menanggapi permintaan rekan kerja, tetapi juga menawarkan bantuannya ketika melihat seorang karyawan dalam kesulitan. Saat mengambil keputusan, ia fokus pada pendapat rekan-rekannya, ketika situasi kontroversial muncul, ia mengadakan diskusi dan berusaha mencapai saling pengertian.

Penetapan setiap pilihan dengan cara ini membuat proses evaluasi menjadi lebih mudah dan lebih sulit bagi para evaluator. Di satu sisi, tidak perlu lagi memilih poin secara subyektif dan meragukan apakah Anda memberi seseorang nilai “D” atau, sebaliknya, memberi nilai “A” kepada semua orang. Kini memilih jawabannya menjadi mudah, Anda hanya perlu membandingkannya dengan perilaku sebenarnya dari karyawan yang perlu dinilai. Sebaliknya, membaca spesifikasi detailnya akan memakan waktu sedikit lebih lama pada awalnya. Namun kami melakukan ini secara sadar - untuk meningkatkan kualitas dan kebenaran penilaian.

Dalam foto: Papan kehormatan yang didekorasi secara profesional di M8 Corporation.

Pengembangan alat untuk penilaian profesional
Penilaian profesional dilakukan terhadap seluruh divisi perusahaan yang meliputi tes dan tugas pengetahuan profesional karyawan, pengetahuan proses di perusahaan, serta kuantitatif hasil penjualan dan penilaian kualitas penjualan bagi penjual. Pengembangan tes profesional yang sesuai dengan fungsi sebenarnya yang dilakukan di perusahaan ternyata merupakan proses yang memakan waktu. Dan dia melewati kita. Manajemen mempercayakan pengembangan tes profesional kepada kepala departemen. Format tugas tes tunggal dipilih, semua tes yang dikembangkan menjalani pemeriksaan ganda oleh manajemen untuk memastikan bahwa tugas memenuhi persyaratan dan tingkat kerumitan yang diinginkan.

Kami terlibat pada tahap pengujian tes profesional, menganalisis kejelasan dan ketidakjelasan formulasi tes untuk personel.
Untuk membuat penilaian profesional lebih fleksibel, pemrogram membuat cangkang untuk mengikuti tes profesional, yang memungkinkan tidak hanya memilih jawaban yang benar dari beberapa opsi, tetapi juga menulis sendiri jawaban atas pertanyaan terbuka. Jawaban atas pertanyaan-pertanyaan tersebut dinilai oleh para ahli (ini adalah manajer yang bertanggung jawab atas tes tertentu). Untuk menghindari bias penilai, nama orang yang menjawab pertanyaan tetap disembunyikan sampai pakar mengevaluasi kebenaran jawaban. Baru setelah itu hasilnya dapat dilihat oleh karyawan dan penilainya.
Saat menyajikan hasil penilaian profesional, kami sekali lagi menekankan pada umpan balik wajib: semua kesalahan dan ketidakakuratan yang dibuat saat mengikuti tes ditampilkan dalam hasil kepada karyawan. Penting bahwa penilaian ditujukan untuk memastikan bahwa karyawan berkembang, termasuk. belajar dari kesalahanmu.

Dalam foto: Tanda khas “Operator mesin penggilingan terbaik” dari M8 Corporation

Pengembangan alat untuk menilai kualitas penjualan: “Belanja Misteri”
Penilaian ini telah menjadi bagian integral dari penilaian profesional terhadap penjual. Kami melakukannya dengan menggunakan metode Mystery Shopping. Biasanya, ketika mengatur penilaian semacam itu, kami mencoba memilih metode verifikasi yang paling ramah lingkungan, berusaha untuk tidak menimbulkan ketidaknyamanan yang tidak masuk akal bagi karyawan perusahaan pelanggan. Dimungkinkan untuk mengatur pementasan penjualan melalui telepon dan tatap muka dengan menggunakan agen pembeli yang terlatih dan artistik, namun penilaian seperti itu seringkali tidak diperlukan dan biaya persiapan tidak selalu sebanding dengan hasil yang diperoleh. Untuk perusahaan M8, diputuskan untuk menggunakan metode yang berbeda.

Untuk memahami bagaimana kami mengatur Mystery Shopper di M8, Anda perlu mengetahui sesuatu tentang perusahaan tersebut. Semua percakapan dari telepon rumah perusahaan direkam. Semua catatan disimpan dalam sistem. Semua karyawan memiliki akses ke catatan ini. Dan tidak satupun dari mereka yang tertarik dengan kesempatan untuk mendengarkan temannya. Budaya komunikasi perusahaan bersifat terbuka. Oleh karena itu, opsi yang kami pilih sangat cocok dengan budaya M8.

Untuk memulainya, daftar periksa dengan pos pemeriksaan untuk memeriksa percakapan dikembangkan dengan karyawan utama perusahaan yang bertanggung jawab untuk melatih tenaga penjualan. Diputuskan untuk memeriksa 3 jenis percakapan: panggilan dari klien baru, panggilan dari klien reguler, dan panggilan dari klien yang tidak puas (opsi terakhir harus ditinggalkan, karena hanya ada sedikit panggilan seperti itu di database dan peringkatnya tidak valid. ).

Kami melatih seorang spesialis untuk mengevaluasi panggilan menggunakan daftar periksa, mengklarifikasi isu-isu kontroversial dan nuansa penjualan. Untuk setiap jenis panggilan, spesialis kami memilih 3 panggilan di database dan menandainya di daftar periksa.

Penting untuk disebutkan bahwa bahkan daftar periksa untuk menilai penjualan telepon telah diotomatisasi oleh pemrogram perusahaan. Sebuah stasiun kerja dilengkapi untuk spesialis kami dengan akses ke database panggilan dan antarmuka untuk membuat catatan. Semua nilai secara otomatis dijumlahkan oleh program, ditambahkan ke penilaian kuantitatif keseluruhan dan, bersama dengan komentar, ditampilkan pada halaman hasil karyawan.
Dengan demikian, karyawan memiliki kesempatan tidak hanya untuk melihat hasil akhir, tetapi juga membaca komentar, melihat daftar periksa dengan nilai mereka, dan mendengarkan panggilan sendiri untuk memahami ketidakakuratan dalam pekerjaan mereka dengan klien.

Di gambar. Tempat kerja untuk menilai penjualan telepon. Monitor menunjukkan antarmuka untuk membuat penilaian oleh penilai dan secangkir besar kopi - alat penting bagi pengamat mana pun.

Penilaian sosiometri tim (implementasi direncanakan nanti)
Saat kami mengembangkan antarmuka penilaian, kami memutuskan untuk menambahkan penilaian sosiometri (analisis kelompok mikro dan komunikasi karyawan dalam tim). Untuk melakukan ini, saat menilai setiap karyawan, 2 pertanyaan muncul di sebelah fotonya:
1. Jika Anda ditugaskan untuk secara mandiri memilih lima karyawan dari perusahaan untuk bergabung dengan tim Anda, apakah Anda akan memilih orang tersebut?
2. Jika Anda berkesempatan melakukan perjalanan bersama lima karyawan perusahaan, apakah Anda akan memilih orang tersebut?
Catatan petunjuk muncul di bawah setiap pertanyaan jika terjadi kesalahpahamaninstruksi atau keinginan untuk mengubah jawaban Anda: Anda telah memilih 5 orang: P. Petrov, I. Ivanov, V. Sidorov, I. Krug, O. Rubinstein. Apakah Anda ingin mengubah pilihan Anda?

Dalam bentuk ini, sosiometri merupakan versi yang disederhanakan dengan rentang pilihan yang kecil untuk kelompok yang relatif besar, namun persyaratan “kebutuhan dan kecukupan” dalam hal ini sangat penting. Tugas utamanya adalah mencari informasi sebanyak mungkin tentang karyawan, namun tidak membebani mereka dengan aktivitas yang tidak perlu. Oleh karena itu, kami menggunakan sosiometri secara tentatif untuk merumuskan hipotesis untuk sutradara dan SDM -manajer perusahaan.

Selanjutnya cukup memasukkan rumus perhitungan dan tampilan grafis ke dalam sistem, kemudian akan menganalisis hasil penilaian, menampilkan koefisien kohesi kelompok, dan juga secara grafis mewakili kelompok karyawan yang berkomunikasi erat satu sama lain.

Persetujuan dan validasi alat
Sebelum memulai penilaian, kami melakukan prosedur pengujian wajib. Untuk melakukan hal ini, kami mengundang beberapa karyawan dari berbagai departemen di perusahaan dan mengadakan “uji coba”. Karyawan sengaja diberi instruksi minimal tentang cara menggunakan sistem sehingga kesulitan dan kesalahan umum dapat diketahui. Ketika pengujian selesai, kami menyiapkan instruksi singkat untuk menggunakan sistem, termasuk jawaban atas kesulitan yang umum.

Dalam foto: menguji sistem dengan karyawan utama M8 Corporation.

Kami melakukan validasi (yaitu memeriksa kecukupan metode untuk mengukur apa yang ingin diukur) dalam beberapa tahap. Validasi tahap pertama adalah memastikan validitas konstruk (mengkorelasikan pernyataan penilaian dengan definisi konsep yang seharusnya diukur), kemudian karakteristik dan uji profisiensi ditinjau oleh ahli dari manajemen perusahaan. Tahap terakhir adalah uji coba penilaian dan wawancara klarifikasi terhadap individu karyawan perusahaan: setelah menjawab pertanyaan, karyawan menjelaskan jawabannya dan memberikan gambaran tentang karyawan yang dinilai, memberikan contoh dan membandingkan pendapatnya dengan penilaian yang dihasilkan. Pemeriksaan ini memastikan bahwa versi singkat dari skala yang dibuat mengukur hal yang sama dengan apa yang penilai akan katakan tentang rekan kerja secara rinci (dan, idealnya, apa yang sebenarnya dia pikirkan tentang rekan kerja tersebut).

Diputuskan untuk tidak menggunakan pemeriksaan validitas tes ulang (penilaian kualitas yang sama dengan menggunakan metode yang berbeda) kali ini, karena Kualitas pribadi karyawan yang dinilai dirumuskan dalam sistem nilai dan kategori budaya perusahaan, yang menjadikannya cukup unik dan sulit diverifikasi dengan alat lain di luar budaya tersebut.

Dalam foto: koridor indah M8 Corporation

Presentasi hasil penilaian
Saat memaparkan hasil evaluasi, penekanannya adalah pada visualisasi, umpan balik wajib, dan rekomendasi pengembangan.
Visualisasi.Setiap penilaian kuantitatif dinyatakan secara grafis - penilaian untuk setiap kualitas diplot pada sumbu koordinat, sebagai hasilnya profil karyawan dibangun.

Penting bagi kami untuk menyampaikan kepada karyawan dan manajer mereka pemahaman bahwa nilai dalam evaluasi dapat bersifat situasional, tidak mencerminkan periode paling sukses dalam kehidupan profesional seorang spesialis dan tidak secara langsung menunjukkan kualitas pribadinya. Oleh karena itu, kami merumuskan seluruh hasil, bahkan untuk peringkat yang sangat rendah, dengan cara yang positif, dengan cakrawala pengembangan karyawan. Saat menilai 360°, rekomendasi harus ditambahkan pada hasil. Untuk setiap kualitas, 3 tingkat transkrip dan rekomendasi individu ditentukan (untuk peringkat di bawah rata-rata, rata-rata, dan di atas rata-rata).

Contohtranskrip hasil penilaian 360° untuk nilai rendah pada kualitas “berjuang untuk berprestasi.”
Hasil Anda : 26% berada di bawah rata-rata perusahaan. Artinya dalam pekerjaan Anda sehari-hari, rekan kerja Anda tidak memperhatikan keinginan Anda untuk mencapai dan menaklukkan ketinggian baru. Sepertinya terkadang Anda dapat meninggalkan pekerjaan yang belum selesai dan berhenti di tengah jalan dalam mencapai tujuan Anda.

Perhatikanlah kualitasmu ini, karena... ketekunan dan mengejar tujuan yang ambisius adalah kualitas yang membedakan orang-orang sukses. Mungkin terkadang Anda tidak perlu khawatir tentang kenyataan bahwa sesuatu mungkin tidak berhasil, tetapi Anda sebaiknya mengambil langkah pertama dan terus meningkatkan standar untuk diri Anda sendiri. Perusahaan kami berkembang begitu cepat sehingga tidak dapat diterima untuk memperlakukan pekerjaan sebagai perubahan “dari bel ke bel.” Itu tidak ada dalam budaya kita. Kami ingin maju dan terus menaklukkan pencapaian baru. Perusahaan mengharapkan tujuan yang lebih ambisius dari Anda dan ketekunan yang lebih besar dalam mencapainya. Lebih baik tersandung beberapa kali tetapi mencapai puncak daripada menyerah pada apa yang telah Anda mulai di tengah jalan.

Rekomendasi : Cobalah untuk mempertimbangkan kembali sikap Anda terhadap tanggung jawab pekerjaan dan tujuan pribadi. Mungkin Anda tidak terlalu menuntut rencana Anda, atau sebaliknya, Anda terlalu ketat pada diri sendiri, itulah sebabnya Anda sering kali tidak dapat memutuskan tugas yang sulit karena takut Anda tidak dapat menyelesaikannya dengan baik. Ketekunan dan fokus untuk mencapai hasil - ini adalah kualitas yang perlu Anda kembangkan agar sukses secara profesional dan pribadi.
Buku-buku berikut akan membantu Anda mengembangkan keinginan untuk berprestasi dan ketekunan dalam mencapai tujuan...

Dalam foto: Interior area kerja di M8 Corporation

Antarmuka evaluasi
Antarmuka penilaian diwakili oleh tab berikut: “Menilai karyawan”, “Hasil penilaian kuantitatif” dan “Hasil penilaian kualitatif”, “Ikuti pengujian profesional”.

Tab "Nilai karyawan"
1. Setiap peserta dapat memilih untuk mengevaluasi karyawan dari struktur perusahaan (sistem mengingatkan berapa banyak orang yang tersisa untuk dievaluasi dan berapa persentase pekerjaan yang diselesaikan).
2. Saat Anda memilih seorang karyawan untuk dievaluasi, foto dan informasi tentang dia dimuat ke halaman.
3. Saat mengevaluasi seorang karyawan, Anda tidak hanya dapat menjawab pertanyaan tentang dia, tetapi juga menuliskan keinginan pribadinya, yang akan tercermin dalam kartu hasilnya.

Tab “Hasil penilaian kuantitatif” dan “Hasil penilaian kualitatif”
Tab ini adalah yang paling penting karena... mewakili seluruh hasil penilaian pribadi karyawan.
1. Pada sumbu kompetensi, penilaian dari setiap level diplot secara bersamaan: manajemen, rekan kerja, bawahan, dan harga diri karyawan. Hal ini memungkinkan Anda membandingkan persepsi orang-orang berbeda di perusahaan tentang diri Anda dan menyesuaikan perilaku Anda dengan mereka.
2. Mulai dari penilaian berikutnya, Anda dapat melihat hasil Anda dari waktu ke waktu pada grafik khusus, yang akan menunjukkan perkembangan mereka dengan paling jelas kepada karyawan.
3. Berdasarkan hasil penilaian, dibangun indikator numerik integral yang mencerminkan kondisi kondisi setiap karyawan dalam peringkat evaluasi akhir di perusahaan. Mulai periode penilaian berikutnya, pegawai akan dapat melihat dinamika indikator-indikator tersebut.
4. Tab ini juga mencerminkan hasil pengujian profesional dan metode Mystery Shopping, yang dinyatakan dalam skor akhir. Jika diinginkan, karyawan tersebut dapat memperluas hasilnya dan melihat daftar semua jawaban atau tindakannya yang salah.
5. Besaran nilai akhir di bawah rata-rata, rata-rata, dan di atas rata-rata akan dihitung secara khusus berdasarkan kinerja perusahaan berdasarkan pembagian nilai internal. Hal ini akan memungkinkan Anda untuk mendasarkan distribusi karyawan ke dalam kelompok-kelompok bukan berdasarkan jumlah ideal, namun berdasarkan perkiraan sebenarnya.

Secara tradisional diyakini bahwa T-34 adalah tank medium yang diproduksi secara massal pertama di dunia dengan sudut kemiringan pelat baja lambung dan menara yang rasional, mesin diesel, dan meriam laras panjang 76 mm. Semua ini benar, sama seperti benar bahwa dalam hal karakteristik kinerjanya, T-34 pada tahun 1941 dapat dianggap sebagai tank medium terkuat di dunia. Namun, kita tidak boleh lupa bahwa tank, seperti jenis peralatan militer lainnya, diciptakan untuk pertempuran, dan sangat penting sejauh mana desainnya memungkinkan penerapan karakteristik tertinggi yang dinyatakan, karena banyak orang, pada pandangan pertama. , solusi desain yang sukses justru bisa berubah menjadi kerugian.

T-34 dikonfigurasikan sesuai dengan desain klasik dengan mesin dan transmisi yang dipasang di belakang. Bentuk lambung dan menaranya diakui oleh lawan dan sekutu sebagai yang paling sukses pada masanya dalam hal ketahanan proyektil dan dianggap sebagai panutan. Namun keajaiban tidak terjadi, dan Anda harus membayar semuanya. Dalam hal ini - berdasarkan volume yang dipesan. Kemiringan besar dari pelindung depan, menguntungkan dari sudut pandang ketahanan proyektil, ditambah dengan susunan mesin 12 silinder besar yang tidak berhasil, meskipun secara struktural lebih sederhana - memanjang, mengurangi volume kompartemen pertempuran dan tidak memungkinkan palka pengemudi untuk ditempatkan pada pelat turret lambung kapal. Akibatnya, palka dibuat di pelat depan, yang secara signifikan mengurangi ketahanannya terhadap proyektil.

Bentuknya yang ramping, cantik dalam penampilan, bahkan menara "tiga puluh empat" yang elegan ternyata terlalu kecil untuk menampung tema artis kaliber 76 mm. Diwarisi dari A-20 ringan, awalnya dimaksudkan untuk memasang meriam 45 mm. Diameter jelas cincin menara tetap sama dengan A-20 - 1420 mm, hanya 100 mm lebih besar dari BT-7.

Volume menara yang terbatas tidak memungkinkan penempatan anggota kru ketiga di dalamnya, dan penembak menggabungkan tugasnya dengan tugas komandan tank, dan kadang-kadang bahkan komandan unit. Kami harus memilih: menembak atau memimpin pertempuran. Kekurangan ini dicatat oleh petugas NIBTPolygon pada tahun 1940, dan kemudian oleh Jerman dan Amerika. Yang terakhir, misalnya, sama sekali tidak mengerti bagaimana awak tank kita bisa muat di menara di musim dingin, ketika mereka mengenakan mantel kulit domba.

Ketatnya menara dan kompartemen pertempuran secara keseluruhan secara signifikan mengurangi semua keunggulan meriam 76 mm yang kuat, yang tidak nyaman untuk dirawat. Sangat disayangkan bahwa amunisi ditempatkan dalam koper vertikal, sehingga mempersulit akses terhadap peluru dan mengurangi laju tembakan.

Tangki diberi ventilasi oleh kipas sistem pendingin dan kipas buang tambahan yang terletak di sekat ruang mesin. Ada lubang ventilasi di atap menara, tapi tidak ada ventilasi paksa! Laporan dari Lokasi Uji NIBT menunjukkan bahwa “kandungan CO ketika dibakar, bahkan dengan ventilasi yang berjalan, secara signifikan melebihi standar yang diizinkan (0,1 mg/l) dan bersifat racun.”

Pada tahun 1940, kelemahan signifikan dari tangki dicatat sebagai penempatan perangkat observasi yang tidak berhasil dan kualitasnya yang rendah. Misalnya, alat penglihatan serba dipasang tepat di belakang komandan tank di penutup palka menara. Akses ke perangkat ini sangat sulit, dan pengamatan dapat dilakukan di sektor terbatas: pandangan horizontal ke kanan hingga 120°; ruang mati 15 m Terbatasnya sektor penglihatan, ketidakmungkinan total observasi di sektor yang tersisa, serta posisi kepala yang canggung selama observasi membuat perangkat penglihatan sama sekali tidak cocok untuk bekerja. Perangkat observasi di sisi menara juga letaknya tidak nyaman. Dalam pertempuran, semua ini menyebabkan hilangnya komunikasi visual antar kendaraan dan deteksi musuh sebelum waktunya. Kelemahan organik T-34 adalah suspensi pegas tipe Christie, yang menyebabkan kendaraan berosilasi kuat saat dikendarai. Selain itu, poros suspensi “memakan” sebagian besar volume yang dipesan.

Keunggulan penting dan tak terbantahkan dari tangki ini adalah penggunaan mesin diesel yang bertenaga dan irit. Namun mesin di dalam tangki beroperasi dalam mode tekanan berlebih, khususnya dalam hal pasokan udara dan pemurnian udara. Laporan Kepala Direktorat ke-2 Direktorat Intelijen Utama Tentara Merah, Mayor Jenderal Pasukan Tank Khlopov, yang disusun berdasarkan hasil pengujian tank di Aberdeen Proving Ground di AS, menyatakan: “Kerugian dari mesin diesel kami adalah pembersih udara yang sangat buruk di tangki T-34. Amerika percaya bahwa hanya penyabot yang dapat membuat alat semacam itu. Mereka juga tidak mengerti mengapa dalam manual kami disebut oli. Pengujian di laboratorium dan pengujian di lapangan menunjukkan bahwa air cleaner sama sekali tidak membersihkan udara yang masuk ke mesin; keluarannya tidak menjamin aliran jumlah udara yang dibutuhkan bahkan saat mesin dalam keadaan idle.

Akibatnya, mesin tidak menghasilkan tenaga penuh - dan debu yang masuk ke dalam silinder menyebabkan pembakarannya sangat cepat, kompresi turun, dan mesin kehilangan lebih banyak tenaga. Tangki medium T-34, setelah berlari sejauh 343 km, rusak total dan tidak dapat diperbaiki. Alasan: Karena pembersih udara pada mesin diesel sangat buruk, banyak kotoran masuk ke dalam mesin dan terjadi kecelakaan, akibatnya piston dan silinder rusak sedemikian rupa sehingga tidak dapat diperbaiki.”

Seperti ini: kurang lebih 300 kilometer - dan tidak ada mesin, dan semua itu karena desain pembersih udara Pomon yang sangat buruk!

Namun, masalah terbesar dari "tiga puluh empat", dan ini dikonfirmasi oleh dokumen Jerman dan Amerika, adalah transmisi, dan yang pertama, desain girboks yang sangat buruk. Inilah yang ditulis pihak Jerman tentang hal ini: “Sebagian besar girboks di tank lawan kami (artinya T-34 dan KB - Catatan Penulis) mengalami pergeseran yang buruk, sebagian karena dalam banyak kasus ini adalah sistem gir yang sederhana; Selain itu, letak mesin dan girboks yang terletak di belakang dalam tangki mengharuskan adanya tuas pengatur gigi yang panjang dan memiliki reaksi balik yang besar karena adanya tautan perantara, yang menyebabkan perpindahan gigi yang salah selama perubahan kecepatan yang cepat. Peralihan yang buruk adalah kelemahan terbesar tank T-34 Soviet. Konsekuensinya adalah keausan kopling yang parah. Hampir semua tank yang kami tangkap, dengan semua bagian utuh, gagal karena kerusakan kopling.”

Karena keausan yang cepat, serta karena desain yang tidak berhasil, kopling utama hampir tidak pernah mati sepenuhnya, “berkendara” dan sulit untuk mengganti gigi dalam kondisi seperti itu. Dengan tidak mematikan kopling utama, hanya mekanik pengemudi yang sangat berpengalaman yang mampu “menempel” gigi yang diinginkan. Sisanya melakukannya dengan lebih sederhana: sebelum penyerangan, gigi ke-2 diaktifkan (gigi start untuk T-34), dan pembatas putaran dilepas dari mesin. Saat melaju, mesin diesel diputar hingga 2.300 rpm, dan tangki berakselerasi hingga 20 - 25 km/jam. Perubahan kecepatan dilakukan dengan mengubah jumlah putaran, atau cukup dengan melepaskan “gas”. Tidak perlu dijelaskan bahwa kelicikan prajurit seperti itu mengurangi umur mesin yang sudah kecil. Namun, ini adalah tank langka yang mampu bertahan hidup dan melihat “jantungnya” menghabiskan setengah dari sumber dayanya.

Penataan tangki bahan bakar samping, terutama di kompartemen pertempuran dan tanpa penutup, tidak bisa dianggap berhasil. Bukan karena kehidupan yang baik sehingga para tanker berusaha mengisi tangki mereka hingga kapasitasnya sebelum pertempuran - uap bahan bakar diesel meledak tidak lebih buruk dari bensin, tetapi bahan bakar diesel sendiri tidak pernah meledak.

Meringkas hal di atas, kita dapat menyimpulkan bahwa pada tahun 1941 kelemahan utama tank T-34 adalah kompartemen pertempuran yang sempit, optik yang buruk, serta mesin dan transmisi yang tidak berfungsi atau hampir tidak berfungsi. Dilihat dari kerugian besar dan banyaknya tank yang ditinggalkan, kekurangan T-34 pada tahun 1941 lebih unggul daripada kelebihannya.

Pembaca mungkin telah memperhatikan bahwa banyak dari kekurangan ini dapat dihindari jika tangki T-34M dengan menara luas tiga tempat duduk dengan diameter bahu besar, diperoleh karena vertikal daripada miring, seperti T-34, memiliki telah dimasukkan ke dalam produksi, lokasi bagian samping, girboks lima kecepatan, suspensi batang torsi, dll. Namun, hal ini tidak terjadi. Apalagi, T-34M rupanya berperan fatal dalam nasib T-34. Karyawan biro desain pabrik No. 183, terbawa oleh desain mesin baru, benar-benar kehilangan pandangan terhadap pekerjaan untuk menghilangkan kekurangan desain dalam serial "tiga puluh empat" dan baru sadar pada awal 1942.

Perlu ditegaskan bahwa T-34 tahun 1941 bukanlah T-34 tahun 1942 dan khususnya tahun 1943. Masalah pada mesin dan transmisi diatasi dengan memasang dua pembersih udara tipe Cyclone, girboks lima kecepatan dengan roda gigi mesh konstan, dan menyempurnakan desain kopling utama. Alhasil, kemampuan manuver tank meningkat tajam.

Jarak pandang dari tangki agak meningkat karena penggunaan perangkat observasi prismatik sebagai pengganti perangkat cermin dan pengenalan pemandangan TMFD-7 baru. Kaset vertikal untuk cangkang diganti dengan kotak horizontal, menyediakan akses ke beberapa tembakan sekaligus. Kipas angin dipasang di menara.

Sayangnya, masalah kompartemen pertempuran yang sempit tidak dapat sepenuhnya diselesaikan. Pengenalan menara baru pada tahun 1942 juga tidak banyak membantu. Dengan mengurangi kemiringan dindingnya, dimungkinkan untuk mencapai lebar bagian dalam yang sedikit lebih besar, tetapi cincin menara tetap sama, dan tidak mungkin untuk menempatkan kapal tanker ketiga di menara. Oleh karena itu, pengenalan kubah komandan pada tahun 1943 tidak memberikan efek yang diinginkan, karena komandan tank masih tidak dapat menembakkan meriam dan menggunakan kubah komandan secara bersamaan. Di medan perang dia ternyata tidak berguna.

Diameter cincin turret yang kecil tidak memungkinkan penempatan senjata kaliber lebih besar di turret T-34. Situasi paradoks tercipta: jika pada awal perang T-34 seringkali tidak mampu menyadari keunggulannya atas tank Jerman dalam hal perlindungan lapis baja, kekuatan senjata dan mobilitas karena kelemahan desain, maka kemunculan “harimau” di medan perang dan “macan kumbang” praktis meniadakan semua upaya untuk menghilangkannya. Pertanyaan mengenai modernisasi yang lebih substansial muncul dalam agenda.

Pada saat yang sama, perlu dicatat bahwa tank T-34, yang pada awalnya memiliki desain yang cukup rumit, selama produksi massal disesuaikan secara maksimal dengan kondisi produksi yang ada selama perang, yang ditandai dengan keterlibatan non-khusus. perusahaan dalam produksi kendaraan tempur dan meluasnya penggunaan tenaga kerja berketerampilan rendah. Dalam hal ini, pekerjaan terencana dilakukan untuk mengurangi jangkauan suku cadang dan mengurangi intensitas tenaga kerja. Jadi, pada tanggal 1 Januari 1941, seluruh intensitas tenaga kerja T-34 dengan bagian lambung dan menara adalah 9465 jam standar, dan pada tanggal 1 Januari 1945 - 3230. Hasilnya, desain tank menjadi sangat disederhanakan; tank ini memiliki kemampuan perbaikan yang tinggi, sehingga memungkinkan untuk memulihkan kendaraan tempur yang rusak dan mengganti unit yang gagal dalam skala besar. Rata-rata, selama tahun-tahun perang, setiap tank T-34 dipulihkan 3-4 kali.

Ternyata, di sinilah letak rahasia kepopuleran kendaraan tempur ini. Itu adalah tank Rusia, untuk tentara Rusia dan industri Rusia, yang disesuaikan secara maksimal dengan kondisi produksi dan operasi kami. Dan hanya orang Rusia yang bisa melawannya! Dia memaafkan apa yang tidak dimaafkan, misalnya, atas segala kelebihannya, kendaraan tempur Lendlease. Mustahil untuk mendekati mereka dengan palu godam dan linggis, atau meluruskan bagian mana pun dengan pukulan sepatu bot.

Satu keadaan lagi harus diperhitungkan. Di benak kebanyakan orang, tank T-34 dan T-34-85 tidak bisa dipisahkan. Dengan senjata terakhir ini kami menerobos masuk ke Berlin dan Praha; senjata ini diproduksi bahkan setelah perang berakhir, digunakan hingga pertengahan tahun 1970an, dan dipasok ke lusinan negara di seluruh dunia. Dalam kebanyakan kasus, T-34-85lah yang menjadi tumpuan. Lingkaran ketenarannya menyebar ke pendahulunya yang kurang sukses. Tapi ini tank yang berbeda dan cerita yang berbeda...

Panjang relatif kompartemen lambung (dalam % panjang lambung bersih) untuk tank medium dari berbagai negara

Diameter cincin menara untuk tank dengan senjata 75 dan 76 mm